打開(kāi)kegg pathway
通路網(wǎng)址http://www.kegg.jp/kegg/pathway.html,尋找??感興趣的通路,找到?類中的某些通路后,然后在我們的KEGG富集結(jié)果中搜索通路編號(hào)。(例:map04213通路是Longevity
regulating pathway),點(diǎn)開(kāi)相應(yīng)?較對(duì)的??版展?結(jié)果,點(diǎn)擊相應(yīng)通路詳細(xì)查看。
?先unique peptide在不同情況下有兩種不同的含義:?種情況指?于定性的unique peptide,第?種情況則是指?于定量的unique peptide。
定性的unique peptide的數(shù)量≥定量的unique peptide數(shù)量。
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),肯定是檢測(cè)到的蛋?質(zhì)的(定性)unique peptide越多,蛋?質(zhì)可信度越?。早些年的發(fā)表?章?般會(huì)認(rèn)為unique peptide≥2的數(shù)據(jù)是可信的蛋?質(zhì)定性數(shù)據(jù)。但是隨著現(xiàn)在質(zhì)譜儀精度和分辨率的提?,對(duì)應(yīng)?精度質(zhì)譜儀(如Q-Exactive,AB5600等等)產(chǎn)?的數(shù)據(jù),像MCP或者JPR這類蛋?質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域最好的雜志,也明確表?認(rèn)可unique peptide=1且對(duì)應(yīng)圖譜質(zhì)量較?的數(shù)據(jù),只是根據(jù)雜志的不同要求需要提交不同格式的圖譜數(shù)據(jù)。如MCP要求最?,需要提交質(zhì)譜原始?件,查庫(kù)結(jié)果?件,而且需要通過(guò)專?的軟件提交(如Pride,ProteomeXchange);JPR要求相對(duì)MCP低些,?般提供?章或附件列表中出現(xiàn)的所有鑒定差異蛋?質(zhì)的unique peptide=1的肽段圖譜即可。
另???,對(duì)于定量unique peptide的數(shù)量,?章?般都沒(méi)有要求??梢岳斫獾氖牵瑢?duì)于只有?段肽定量?個(gè)蛋?質(zhì)的情況,蛋?質(zhì)定量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性會(huì)相對(duì)較低。通常情況下,通過(guò)設(shè)置?物學(xué)或者技術(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn),根據(jù)蛋?質(zhì)定量數(shù)據(jù)的平均值和統(tǒng)計(jì)學(xué)p value值可以獲得準(zhǔn)確度和可信度較?的蛋?質(zhì)定量結(jié)果。純粹的?次質(zhì)譜?為則不能反映其定量準(zhǔn)確性。
UniPort數(shù)據(jù)庫(kù)是動(dòng)態(tài)更新的,其中存在的?些重復(fù)、冗余、有誤的數(shù)據(jù)會(huì)被不斷地糾正和刪除。標(biāo)注為Obsolete的蛋白質(zhì),?般是通過(guò)測(cè)序結(jié)果直接翻譯?來(lái),先存放在TrEMBL里,注釋信息不全,甚?這個(gè)蛋?是否存在也不確定。經(jīng)過(guò)人工校驗(yàn)和注解后,?部分不存在的蛋?質(zhì)會(huì)被刪除,狀態(tài)顯?為Obsolete(如F1MYU3這個(gè)蛋? 已經(jīng)從數(shù)據(jù)庫(kù)中刪除了),?部分經(jīng)過(guò)注釋后會(huì)被移到SwisspProt,或者這個(gè)蛋?質(zhì)已經(jīng)在數(shù)據(jù)庫(kù)中存在了,就和已存在的合并,顯?為Replaced。這些蛋?質(zhì)可以通過(guò)對(duì)應(yīng)??中的“history…”追蹤到數(shù)據(jù)庫(kù)中該蛋?質(zhì)信息的更新過(guò)程。
這種情況是可能存在的,許多斷裂基因在其轉(zhuǎn)錄本剪接中,通過(guò)不同的剪接?式從?個(gè)基因產(chǎn)?多種不同的多肽或蛋?質(zhì)。生物體通過(guò)這種選擇性剪接(alternative splicing)來(lái)調(diào)控基因的表達(dá),產(chǎn)?不同的蛋?質(zhì)以適應(yīng)不同的環(huán)境需要。例如:?類2萬(wàn)個(gè)基因,編碼20萬(wàn)個(gè)蛋? 。
不同數(shù)據(jù)庫(kù)有不同的命名方式及特征,現(xiàn)在較常用的UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(www.uniprot.org)的命名格式如下:
tr|W6NF68|W6NF68_HAECO DNA RNA he licase domain containing protein OS=Haemonchus contortus GN=HCO I _01691200 PE=4 SV=1,代表的意義為tr=TrEMBL(UniProtKB中包含兩類數(shù)據(jù)庫(kù):Swiss-Prot,which is manually annotated and reviewed;TrEMBL,which is automatically annotated and is not reviewed.),W6NF68為蛋?質(zhì)登錄號(hào),HAECO DNA RNA helicase domain containing protein 為蛋?質(zhì)名稱及其描述 ,OS= Organism Name(物種名稱),GN=Gene Name(基因名稱),PE=Protein Existence ,SV=Sequence Version。 In UniProtKB there are 5 types of evidence for the existence of a protein:
1. Experimental evidence at protein level
2. Experimental evidence at transcript level
3. Protein inferred from homology
4. Protein predicted
5. Protein uncertain
我們?cè)诘?數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定蛋?以及GO、COG、KEGG等注釋蛋?都是根據(jù)其蛋?序列?對(duì)的結(jié)果。要查 看其他信息,打開(kāi)Uniprot?站,輸?該蛋?ID,即可看到該蛋?的名稱,特性,涉及通路等信息。其他數(shù)據(jù)庫(kù)的可以NR注釋。
質(zhì)譜定量與western定量原理本?不同,所以最終鑒定結(jié)果有差異是屬于正?,F(xiàn)象;另外對(duì)于豐度較低的蛋白,質(zhì)譜鑒定的靈敏度會(huì)降低,容易出現(xiàn)偏差;另外TMT產(chǎn)品屬于標(biāo)記定量,對(duì)不同樣本間蛋?的差異會(huì)有?定壓縮,所以差異不?的兩個(gè)樣本,如果采?TMT可能就會(huì)表現(xiàn)出?乎?差異;這也是為何發(fā)?章時(shí)為了增加數(shù)據(jù)的可靠性,都會(huì)增加實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的原因。
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